Arrays de tejidos y la prueba de microdisección

Con el mismo objetivo se diseñarán arrays de tejidos para ciertos tumores. La metodología empleada consiste en incluir en un bloque de parafina entre 100 y 500 pequeños cilindros de sendos tumores para estudiarlos simultáneamente. Esta técnica es conocida como Tissue Micro-Arrays o Micro-arrays (micro matrices) de tejidos.

Como complemento a esta tecnología se encuentra la microdisección (con o sin láser) que permite contar con poblaciones puras de tejidos o células para obtener su caracterización. El empleo de esta tecnología es útil no sólo para los patólogos moleculares, sino para cualquier investigador.

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Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real

Una aplicación clínica de la PCR en tiempo real es la detección de enfermedad mínima residual. Ésta es una situación de la enfermedad neoplásica posterior a su tratamiento, en la que el tumor no se puede detectar por técnicas de imagen, pero hay evidencia de la presencia de células tumorales circulantes o residuales en un tejido. Existen dos métodos para diagnosticar la enfermedad mínima residual: mediante la citometría de flujo y mediante técnicas procedentes de la biología molecular, como es el PCR en tiempo real.

Teniendo marcadores específicos de las células de ciertos tumores como por ejemplo las translocaciones (intercambio de material genético entre uno o varios cromosomas) en los sarcomas, se pretende desarrollar protocolos, mediante el empleo de PCR en tiempo real, para detectar la enfermedad mínima residual.

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Tecnología fish y cish

Para detectar o confirmar anomalías genéticas o cromosómicas, que están más allá del poder de resolución de la citogenética de rutina, se emplea la denominada FISH. Esta es una tecnología que utiliza sondas de DNA marcadas con fluorescencia. Se utiliza de rutina en neoplasias hematológicas (ver grupo del Prof. San Miguel/Unidad de Citogenética Tumoral), pero en el Laboratorio de Patología Molecular Diagnóstica se empleará también para la detección de translocaciones en tumores sólidos, fundamentalmente sarcomas. En el laboratorio del Dr. De Álava se complementarán los resultados obtenidos mediante la tecnología FISH, con la tecnología CISH.

Esta técnica no marca con florescencia sino con cromógeno, para que las anomalías se puedan detectar con un sistema de visualización similar al de la inmunohistoquímica y observarse mediante el empleo de un microscopio normal (la técnica FISH requiere un microscopio de fluorescencia).

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Arrays de cDNA

Se está investigando el diseño de Arrays (matrices) de cDNA para mejorar el diagnóstico de determinados tumores. La ventaja de esta tecnología es el gran potencial que tiene respecto a otros métodos empleados en los estudios genéticos. El grupo de investigación liderado por el Dr. Álava hará uso de los arrays de cDNA con características específicas. Se diseñarán arrays que incluyan entre 50 y 100 genes, que habrán sido previamente seleccionados por su relevancia para un mejor diagnóstico o predicción de respuesta al tratamiento de determinadas enfermedades.

En esta línea cabe señalar la colaboración que mantiene este grupo de investigación con la Red Temática sobre Tumores Sólidos Pediátricos para diseñar Arrays similares para estos tumores.

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Oferta de las técnicas diagnósticas

El catálogo que se prevé estará totalmente disponible en agosto de 2004 incluye

Todas estas técnicas expuestas forman parte del catálogo de servicios de la Unidad de Diagnóstico Molecular y Celular del CIC. De este modo estas pruebas pasan del ámbito del laboratorio a constituir un servicio ofrecido a la comunidad médica. El Laboratorio de Patología Molecular Diagnóstica requiere por esta razón estar perfectamente coordinado con las otras Unidades de Interés Sanitario del CIC, como por ejemplo el Banco de Tumores.

Gracias a las ayudas recibidas de la Junta de Castilla y León y de las redes temáticas de Investigación Cooperativa del Instituto Carlos III, estas técnicas estarán a disposición del Sistema Nacional de Salud y de aquellos centros vinculados con las redes temáticas de investigación.

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